Возможно, вы сменили регион при заполнении корзины.
Часть товаров из корзины будет перемещена в статус отложенных
и не сможет быть оформлена для заказа, если вы продолжите работу в данном регионе
Реактивы для генной инженерии и молекулярной биологии ИПТГ и X-Gal – лучший выбор!
03.11.2023
Компания Диаэм предлагает реактивы для генной инженерии и молекулярной биологии, в том числе индуктор lac-оперона ИПТГ и хромогенный субстрат X-Gal, используемые для проведения бело-голубого скрининга. Метод бело-голубой селекции – это колориметрическая система отбора рекомбинантных клонов, которая основана на изменении цвета бактериальных колоний в зависимости от наличия или отсутствия генно-инженерной вставки в плазмиде. Это простой и эффективный метод выявления рекомбинантных бактерий в экспериментах по клонированию.
Центральное место в этой технике занимает активность β-галактозидазы, фермента, кодируемого геном lacZ у E. coli, который метаболизирует лактозу с образованием глюкозы и галактозы. В активном состоянии он существует в виде тетрамера. Присутствие лактозы в окружающей среде запускает оперон lacZ в E. coli, что приводит к продукции фермента β-галактозидазы. Большинство плазмидных векторов несут короткий сегмент гена lacZα, который кодирует α-пептид, неактивный сегмент β-галактозидазы. Используемые в клонировании штаммы E. coli представляют собой компетентные клетки, содержащие делеционную мутацию lacZΔM15 и продуцирующие мутантную форму β-галактозидазы , неспособную образовывать тетрамер. Однако, в присутствии α-пептида эта мутантная форма белка может полностью вернуться в свое активное тетрамерное состояние. Восстановление функции мутантной β-галактозидазы с помощью α-пептида называется α-комплементацией.
Альтернативно, β-галактозидаза может гидролизовать другой субстрат, X-Gal, в результате чего образуется производное индиго синего цвета. X-gal, или 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-галактопиранозид — хромогенный субстрат для β-галактозидазы, образующий при гидролизе темно-синий продукт.
Процесс α-комплементации используется в качестве маркера рекомбинации. Клонирование чужеродного гена в вектор происходит внутрь гена β-галактозидазы (lacZ) в области MCS (мультиклональный сайт, полилинкер) (рис.1). В результате этого происходит разрыв кодирующей части гена lacZ и инактивация β-галактозидазы.
Для скрининга клонов, содержащих рекомбинантную ДНК, в чашку с агаром добавляют X-gal. Если образуется β-галактозидаза, X-gal гидролизуется с образованием нерастворимого синего пигмента. Поэтому колонии синего цвета образованы клетками, не содержащими вставку. Колонии, несущие рекомбинантную плазмидную ДНК, выглядят белыми из-за нарушения гена lacZ. Для проведения бело-голубого скрининга после трансформации вместе с X-Gal добавляют Изопропил-β-D-тиогалактопиранозид, или ИПТГ, который служит индуктором экспрессии гена lacZ ω.
Рис.1. Схематическое изображение бело-голубого скрининга.
1 – Рестрикция;
2 – лигирование;
3 - трансформация;
4 - скрининг на среде, содержащей X-gal и ИПТГ.
ИПТГ (Изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид) - высокостабильный аналог лактозы. Он инактивирует lac-репрессор и индуцирует синтез бета-галактозидазы, фермента, метаболизирующего лактозу. Используется как индуктор экспрессии генов, клонированных под контроль lac-оперона.
Также используется совместно с X-Gal для бело-голубой селекции клонов.
Рекомендуется приготовление стокового раствора в концентрации 100 мМ. Для бело-голубой селекции используется конечная концентрация 0.1 мМ.
X-gal, или 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-галактопиранозид — хромогенный субстрат для фермента бета-галактозидазы. При расщеплении бета-галактозидазой от субстрата отщепляется индольная структура, которая спонтанно окисляется и выпадает в виде осадка синего цвета. Это свойство широко используется в молекулярной и клеточной биологии.
В первую очередь, X-gal применяется для анализа активности репортерного гена lacZ, кодирующего бета-галактозидазу, в клетках бактерий, дрожжей и животных. В растениях в качестве репортерного гена, маркером активности которого также является X-gal, используется ген GUS.
Также X-gal используется совместно с конъюгатами гликозидаз в качестве
реагента для вторичной детекции при иммуногистохимии и ELISA.
Наконец, поскольку бета-галактозидаза сохраняет свою активность в фиксированных клетках и тканях, X-gal используется для детекции её активности.
X-gal, известный как 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-галактопиранозид, представляет собой хромогенный субстрат для фермента бета-галактозидазы. В процессе расщепления этого субстрата ферментом происходит отделение индольной структуры, которая затем окисляется и преобразуется в осадок синего цвета. Эта характеристика находит широкое применение в областях клеточной и молекулярной биологии.
Основное использование X-gal заключается в анализе активности гена-репортера lacZ, который кодирует бета-галактозидазу в клетках бактерий, дрожжей и животных. В растительных клетках для анализа активности используется репортерный ген GUS, с X-gal в качестве маркера активности.
Кроме того, X-gal применяется в сочетании с гликозидазными конъюгатами в качестве реагента для вторичного обнаружения в методиках иммуногистохимии и ELISA.
Благодаря тому, что бета-галактозидаза остается активной в фиксированных клетках и тканях, X-gal эффективно используется для детекции её активности.
CAS-No.
7240-90-6
Химическая формула
C₁₄H₁₅BrClNO₆
Молекулярная масса, г/моль
408,63
Внешний вид
Белый или светло-желтый порошок
Содержание основного вещества, %
98,0
Растворимость
Растворим в диметилформамиде
Рефрактометрический индекс α20°/D
-72,0° до -60,0°
Температура плавления, °С
230
Вода (К. Фишер), %
1
DNase, RNase
Не обнаружено
Индекс опасности
H271
Может вызвать горение и взрыв; сильный окислитель
Индекс опасности (H)
H271
Индекс предупреждения
P411
Хранить при температурах не выше …°C/…°F.
Индекс предупреждения (P)
P411
Ферменты и вода для молекулярной биологии
Товары будут загружены при просмотре раздела
Среды для культивирования
Товары будут загружены при просмотре раздела
Наборы для клонирования
Товары будут загружены при просмотре раздела
Реактивы и наборы для выделения, очистки, элюции, наборы и экстра миксы для ПЦР
Ниже вы можете задать вопрос или оставить запрос в свободной форме:
Файлы cookie
Ознакомьтесь с Политикой конфиденциальности, чтобы узнать больше о том, что такое cookies, а так же как и зачем мы используем их. Закрывая данное окно, вы отказываетесь от всех cookies.
Теперь с помощью мобильного телефона легко искать интересующее Вас оборудование,
реактивы и расходные материалы, проверять наличие на складе, сделать заказ
и отслеживать его выполнение!
Подпишитесь на канал Telegram Диаэм
Будьте в курсе последних новостей науки, технологий и интересных предложений!
Актуальные новости из мира Life sciences, биотехнологий и аналитической химии
стали еще доступнее.
Регистрация на сайте компании Диаэм доступна только для юридических лиц, для физических лиц сделать заказ и узнать его статус можно без регистрации или обратившись в компанию по телефону +7 495-745-0508 или электронной почте info@dia-m.ru
