Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Пропидия йодид (PI) образовывать крепкие связи с ДНК, давая излучение в красном диапазоне при встраивании в двухцепочечную ДНК. Эта особенность используется для окраски ДНК клеток. Краситель не способен проходить сквозь оболочки живых клеток, не имеющие повреждений, но попадает внутрь через разрушенные мембраны омертвевших клеток, а также клеток в позднем апоптозе. С учетом этой характеристики, пропидий йодид применим вместе с флуоресцентными зондами (Calcein-AM, FDA) для окраски омертвевших клеток и наблюдения за ними.

Раствор для окрашивания на основе пропидия йодида представляет собой готовый к использованию флуоресцентный раствор с концентрацией 100 мкг /мл. Применим для разметки ядер мертвых клеток. Одного флакона хватает примерно на 500 окрашиваний.

Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Аннексин V обладает высоким сродством к фосфатидилсерину и признан одним из чувствительных индикаторов для выявления раннего клеточного апоптоза.

Набор также содержит популярный флуоресцентный краситель пропидий йодид (PI), который не проникает в живые клетки, и обычно используется для обнаружения мертвых клеток в популяции.

Подходит для проточной цитометрии и флуоресцентного микроскопа.

Хранить при 4-8 °C до 12 месяцев, аннексин V-FITC хранить при -20 °C без длительного использования.

Набор состоит из двух самых популярных красителей содержит пропидия йодид (PI) и Кальцеин АМ.

Пропидия йодид способен проникать и интегрироваться в двойную спираль ДНК внутри клетки, светится красным цветом и используется для окрашивания мертвых клеток или находящихся на стадии позднего апоптоза, поскольку способен проходить только через нарушенные оболочки клеток.

Кальцеин АМ проникает в живые клетки, обладая низкой токсичностью для них, почти не нарушает функции и структурные особенности клеток и органелл. Применим для работы с большинством эукариотических клеток, не используется при работе с клетками бактерий и грибов, потому что их клеточные мембраны для красителя непроницаемы. Светится зеленым цветом, который обеспечивается за счет гидролиза ацетоксиметилового эфира при взаимодействии с эстеразами внутри клеток. Так как в погибших клетках эстераз нет, их свечение не происходит.

Кальцеин АМ (ацетоксиметиловый эфир кальцеина) содержит группу ацетилметоксиметилового эфира (АМ), которая увеличивает гидрофобность, что позволяет ему с легкостью проходить сквозь мембранную оболочку живых клеток. При попадании внутрь способен расщепляться до кальцеина эндогенными клеточными эстеразами. С потерей AM-группы краситель больше не способен легко проникать сквозь оболочку и, таким образом, удерживается внутри клетки; этот зонд способен источать яркий зеленый свет при связывании с ионами кальция, находящимися внутри клеток. При некоторых условиях проведения экспериментов может излучать синий свет.

Комплект красителей оптимизирован и улучшен производителем для выполнения двойной окраски с помощью Кальцеина AM живых клеток и PI-маркировки мертвых клеток, что позволяет анализировать уровни жизнеспособности и состояния как живых, так и мертвых клеток.

Кальцеин АМ (ацетоксиметиловый эфир кальцеина) — нефлуоресцентный гидрофобный краситель, который способен проникать в клетку сквозь ее мембрану. Попадая внутрь клетки, гилролизуется эндогенными эстеразами, получается сильно отрицательно заряженная полярная молекула кальцеина, которая не может снова пройти через мембрану, и таким способом удерживается внутри клетки.

Кальцеин (максимальная длина волны возбуждения: 494 нм; максимальная длина волны излучения: 517 нм) способен светиться ярким зеленым светом. По сравнению с другими красителями, такими, как BCECF AM и CFDA AM, Кальцеин АМ считается одним из лучших флуоресцентных вариантов из-за низкого уровня цито-токсичности. Он также практически не оказывает влияния на клеточные функции и особенности, такие, как пролиферация, хемотаксис лимфоцитов и низкая чувствительность к рН.

Из-за отсутствия эстеразы в некротизированных клетках Кальцеин АМ используется только для тестирования показателей жизнеспособности и кратковременного мечения живых клеток. В сочетании с пропидия йодидом позволяет одновременно окрасить флуоресцентными красителями и живые, и мертвые клетки, что полезно для оценки общей или среднестатистической жизнеспособности.

Продукт предназначен только для научных исследований, его не следует использовать профессионалам для диагностических процедур или лечения, употреблять в пищу или принимать в качестве лекарства, а также его нежелательно хранить в обычных жилых помещениях. Применение красителя требует лабораторного халата и одноразовых перчаток.

Набор для определения апоптотических клеток содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических и некротических клеток с помощью аннексина V, конъюгированного с AF488, и йодистого пропидия.

AF488 — сульфированный родамин, яркий, фотостабильный и гидрофильный флуорофор. Краситель излучает в зеленом (FITC) канале.

• Максимум поглощения, нм — 495;
• максимум эмиссии, нм — 519.

Йодистый пропидий (PI) — непроницаемый через плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале.

• Максимум поглощения, нм — 535;
• максимум эмиссии, нм — 617.

Состав набора для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF488

• Аннексин V, AF488 конъюгат, мкг – 5;
• Propidium Iodide solution, 0,1 мг/мл, мкл – 100;
• Annexin V Binding Buffer, 5x, мл – 15.

Условия транспортировки и хранения

• Транспортировка – до трех недель при комнатной температуре;
• хранение, °С – -20°С;
• срок хранения – 12 месяцев.

Рекомендуемые концентрации аннексина V-AF488 — от 2 до 5 мкг/мл, в зависимости от исследуемой клеточной культуры. Перед экспериментом необходимо опробовать разные разведения аннексина V-AF488 для определения оптимальной концентрации.

Окрашивание с помощью йодистого пропидия — опционально. Этот этап можно пропустить, если в задачах нет необходимости исследовать некроз.

Важно! Аннексин V можно использовать в качестве маркера апоптоза только в клетках с интактной плазматической мембраной. При нарушении целостности плазматической мембраны аннексин V может связываться с ФС внутри клетки и давать ложноположительный результат.

Применение набора для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF488

Приготовление растворов

1. Растворите содержимое пробирки с лиофилизированным аннексином V-AF488 в 250 мкл деионизованной воды.

Важно! Разведенный рекомбинантный белок необходимо хранить защищенным от света при температуре 2-8°C. В растворе конъюгат стабилен в течение месяца. При длительных экспериментах рекомендуется приготовить аликвоты и хранить их при температуре −20°С. Избегать повторного замораживания!

2. Приготовьте необходимый объём 1х буфера для связывания, смешав 1 часть 5х буфера для связывания с 4 частями деионизованной воды.

Окрашивание клеток

1. Адгезированные клетки аккуратно снимите с поверхности роста подходящим способом. С суспензионными клетками начинайте работу со следующего пункта.2. Промойте клетки один раз охлаждённым PBS (рН7.4) и один раз 1х буфером для связывания.

3. Ресуспензируйте клетки в холодном 1х буфере для связывания.

4. Отберите 100 мкл суспензии клеток (от 1×105 до 1×106 клеток/мл) в микроцентрифужные пробирки объемом 1.5 мл. Для проточной цитометрии необходимо заготовить дополнительные пробирки с соответствующими контролями (см. описание контролей ниже).

5. Добавьте 2-5 мкл раствора аннексина V-AF488 в каждую пробирку, инкубируйте в течение 10-15 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте.

6. Без предварительной отмывки добавьте 400 мкл 1x буфера для связывания в каждую пробирку.

7. (Опционально) Добавьте 5 мкл йодистого пропидия в каждую пробирку с клетками. Аккуратно перемешайте содержимое пробирки и инкубируйте в течение 5 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте.

Важно! Не промывайте клетки от йодистого пропидия. Йодистый пропидий должен оставаться в буфере во время сбора данных.

8. Окрашенные клетки храните при температуре 2-8°C в защищенном от света месте до проведения анализа.

Важно! Количественное определение клеток методом проточной цитометрии или флуоресцентной микроскопии необходимо производить в течение 4 ч от начала окрашивания из-за негативного воздействия йодидистого пропидия на жизнеспособность клеток.

Проточная цитометрия

1. Для цитофлуориметрического анализа апоптоза и некроза клеток с помощью аннексина V-AF488 и йодистого пропидия помимо целевого окрашивания необходимо приготовить контроли: неокрашенные клетки (отрицательный контроль для настройки прибора); клетки, окрашенные только аннексином V-AF488, и клетки, окрашенные только йодистым пропидием (для настройки компенсации).

2. Анализ связывания аннексина V-AF488 проводят с использованием детектора сигнала FITC.

3. Анализ клеток, окрашенных йодистым пропидием, осуществляют с помощью детектора сигнала фикоэритрина.

Флуоресцентная микроскопия

1. Отберите каплю суспензии с окрашенными клетками и поместите ее на предметное стекло. Накройте клетки покровным стеклом.

2. В качестве альтернативы, адгезированные клетки можно окрашивать непосредственно на покровном стекле. После окрашивания переверните покровное стекло на предметное, так, чтобы клетки находились между предметным и покровным стёклами.

3. (Опционально) Клетки после окрашивания аннексином V, перед визуализацией можно промыть 1х буфером для связывания и зафиксировать в 2% параформальдегиде. Не фиксируйте клетки перед инкубацией с аннексином V-AF488, поскольку любое нарушение клеточной мембраны может вызвать неспецифическое связывание аннексина V с ФС на внутренней поверхности клеточной мембраны.

4. Исследование клеток под флуоресцентным микроскопом осуществляют, используя двойной набор фильтров для FITC и родамина.

Результат окрашивания

• Ранние апоптотические клетки, связавшие аннексин V-AF488, окрашиваются в зеленый цвет в плазматической мембране.
• Некротические клетки в результате проникновения йодистого пропидия внутрь клетки будут окрашены красным.
• Апоптотические клетки с нарушенной в результате вторичного некроза целостностью мембраны будут иметь красное окрашивание (йодистый пропидий) и ореол зеленого окрашивания (AF488) на клеточной поверхности (плазматическая мембрана).
• Здоровые клетки будут лишены окрашивания.

Счетчик клеток LUNA-STEM оснащен двумя каналами флуоресценции и оптикой светлого поля, позволяющей отличать живые и мертвые клетки с ядром от клеток без ядра. Счетчик LUNA-STEM совместим со стволовыми клетки и клетками стромально-васкулярной фракции жировой ткани (SVF) и дает представление об общей концентрации клеток, концентрации ядерных и неядерных клеток, жизнеспособности клеток и их размере.

Характеристики счетчика клеток Luna-STEM

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–90;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 5–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ –1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• время обработки, сек — 30-60;
• встроенное ПО;
• интерфейс USB;
• внутренняя память;
• камера, МП — 5;
• ручная фокусировка;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• Ex: 470±20 нм (синий), Em: 525±25 нм (зеленый), 600 LP (красный);
• оптика светлого поля;
• счет по красителям Йодиду пропидия, Акридиновому оранжевому;
• габариты, Ш×Г×В, см — 22×21×9;
• вес, кг — 1,8.

Комплект поставки: счетчик клеток, слайд для флюоресценции, USB накопитель, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы.

Аксессуары и опции: принтер, бумага для принтера, многоразовый слайд, слайд для анализа флуоресценции, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы, валидация IQ/OQ.

Счетчик клеток Luna-FX7 позволяет быстро и эффективно проводить подсчет клеток, определять их жизнеспособность, размер, определять эффективность флуоресценции клеток. Совместим с клеточными линиями, первичными клеточными культурами, клетками из цельной крови, мононуклеалистическими клетками крови (PBMC), спленоцитами, тимоцитами, клетками дрожжей.

Характеристики счетчика клеток Luna-FX7

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–90;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 3–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ – 5×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• варианты исполнения слайдов — 1, 2, 3, 8 камерные;
• время обработки, сек — в светлом поле для 12 изображений не более 10 с ручной фокусировкой, не более 20 — с автофокусом, при флюоресценции для 12 изображений не более 30 с ручной фокусировкой, не более 40 — с автофокусом;
• встроенное ПО для отслеживания биопроцессов;
  
• интерфейс USB, Wi-Fi, Internet;
• внутренняя память на 1 Тб;
• ручная фокусировка;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• счет в светлом поле;
• счет по красителям трипановому синему, Эритрозину В, Йодиду пропидия / Акридиновому оранжевому, Диацетат Флуоресцеину;
• флуоресценция в зеленом свете — Ex: 470±20 нм, Em: 530±25 нм;
• флуоресценция в красном свете — Ex: 530±20 нм, Em: 620±30 нм;
• габариты, Ш×Г×В, см — 24,5×28×24;
• вес, кг — 4,5.

Комплект поставки: счетчик клеток, одноразовый слайд, USB накопитель, краситель трипановый синий, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы.

Аксессуары и опции: опции: принтер, бумага для принтера, одноразовый слайд, слайд для для анализа флуоресценции, краситель трипановый синий, краситель Эритрозин B, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, валидация IQ/OQ, дополнительное ПО для соответствия требованиям FDA 21 CFR, часть 11.

Счетчик клеток Luna-FL позволяет быстро и эффективно проводить подсчет клеток в светлом поле, подсчет флуоресцентных клеток, подсчет клеток дрожжей и анализ трансфекции GFP. Совместим с клеточными линиями, первичными клеточными культурами, клетками крови, мононуклеалистическими клетками крови (PBMC), спленоцитами, тимоцитами, клетками дрожжей, клетками, экспрессирующими GFP.

Характеристики счетчика клеток Luna-FL

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–90;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 5–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴–1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• время обработки, сек — в светлом поле не более 10, при флюоресценции не более 30;
• встроенное ПО;
• интерфейс USB;
• внутренняя память;
• камера, МП — 5;
• ручная фокусировка;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• Ex: 470±20 нм (синий), Em: 525±25 нм (зеленый), 600 LP (красный);
• счет в светлом поле;
• счет по красителям трипановому синему, Эритрозину В, Йодиду пропидия / Акридиновому оранжевому, Диацетат Флуоресцеину;
• габариты, Ш×Г×В, см — 22×21×9;
• вес, кг — 1,8.

Комплект поставки: счетчик клеток, слайд для флюоресценции, USB накопитель, краситель трипановый синий, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы.

Аксессуары и опции: принтер, бумага для принтера, одноразовый слайд, многоразовый слайд, слайд для анализа флуоресценции, краситель трипановый синий, краситель Эритрозин B, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, валидация IQ/OQ.

Счетчик клеток Luna-FX7 позволяет быстро и эффективно проводить подсчет клеток, определять их жизнеспособность, размер, определять эффективность флуоресценции клеток. Совместим с клеточными линиями, первичными клеточными культурами, клетками из цельной крови, мононуклеалистическими клетками крови (PBMC), спленоцитами, тимоцитами, клетками дрожжей.

Характеристики счетчика клеток Luna-FX7

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–90;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 3–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ – 5×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• варианты исполнения слайдов — 1, 2, 3, 8 камерные;
• время обработки, сек — в светлом поле для 12 изображений не более 10 с ручной фокусировкой, не более 20 — с автофокусом, при флюоресценции для 12 изображений не более 30 с ручной фокусировкой, не более 40 — с автофокусом;
• встроенное ПО;
• интерфейс USB, Wi-Fi, Internet;
• внутренняя память на 250 Гб;
• ручная фокусировка;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• счет в светлом поле;
• счет по красителям трипановому синему, Эритрозину В, Йодиду пропидия / Акридиновому оранжевому, Диацетат Флуоресцеину;
• флуоресценция в зеленом свете — Ex: 470±20 нм, Em: 530±25 нм;
• флуоресценция в красном свете — Ex: 530±20 нм, Em: 620±30 нм;
• габариты, Ш×Г×В, см — 24,5×28×24;
• вес, кг — 4,5.

Комплект поставки: счетчик клеток, одноразовый слайд, USB накопитель, краситель трипановый синий, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы.

Аксессуары и опции: опции: принтер, бумага для принтера, одноразовый слайд, слайд для для анализа флуоресценции, краситель трипановый синий, краситель Эритрозин B, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, валидация IQ/OQ, дополнительное ПО для соответствия требованиям FDA 21 CFR, часть 11.

Счетчик клеток LUNA-II YF позволяет быстро и эффективно проводить подсчет дрожжевых клеток, определять их жизнеспособность и размер. В отличие от проточных цитометров, счетчик LUNA-II YF обладает расширенными возможностями декластеризации, благодаря чему будут подсчитаны даже самые слипшиеся клетки.

Характеристики счетчика клеток LUNA-II YF

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–60;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–30;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 5×10⁴ –1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл —10;
• время обработки, сек — не более 10 (ручная фокусировка), не более 15 (автофокус);
• встроенное ПО;
• интерфейс USB;
• внутренняя память на 1000 измерений;
• возможность установить до 300 пользовательских протоколов;
• камера, МП — 1,1;
• ручная фокусировка;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• счет по красителям Йодиду пропидия, Акридиновому оранжевому, Диацетат
• Флуоресцеину;
• габариты, Ш×Г×В, см — 16×18×28;
• вес, кг — 1,8.

Комплект поставки: счетчик клеток, слайд для анализа флуоресценции, USB накопитель, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, буфер.

Аксессуары и опции: принтер, бумага для принтера, многоразовый слайд, слайд для анализа флуоресценции, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы, буфер для разведения клеток, набор для определения жизнеспособности дрожжевых клеток, валидация IQ/OQ.

Счетчик микробных клеток QUANTOM Tx — это автоматический счетчик клеток на основе изображений, который может идентифицировать и подсчитывать отдельные бактериальные клетки за считанные минуты.

Счетчик QUANTOM Tx автоматически фокусирует, захватывает и анализирует несколько изображений окрашенных флуоресценцией клеток для обнаружения бактериальных клеток с высокой чувствительностью и точностью. Благодаря новому программному обеспечению для обнаружения и удаления клеток, счетчик QUANTOM Tx может точно идентифицировать отдельные бактериальные клетки даже в самых плотных популяциях.

Характеристики счетчика клеток QUANTOM Tx

• Диапазон измерений размера микробных клеток, мкм — 0,3–50;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁵ –1×10⁹;
• минимальный объем образца, мкл — 0,17 (для 20 изображений);
• время обработки, сек — не более 30 (для 10 изображений);
• встроенное ПО;
• интерфейс USB, Wi-Fi;
• внутренняя память на 128 Гб;
• объектив — 10×;
• ручная фокусировка;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• подсчет флуоресцентно окрашенных микробных клеток;
• Ex 470/30 нм, Em 530/50 нм;
• габариты, Ш×Г×В, см — 43,3×31×22,5;
• вес, кг — 10,8.

Центрифуга QUANTOM имеет решающее значение для распределения клеток вдоль одной плоскости для точного подсчета с помощью счетчика QUANTOM Tx. Приобретается отдельно.

Комплект поставки: счетчик клеток, слайд для анализа флуоресценции, USB накопитель, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, буфер.

Аксессуары и опции: принтер, бумага для принтера, многоразовый слайд, слайд для анализа флуоресценции, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы, буфер для разведения клеток, набор для определения жизнеспособности дрожжевых клеток, валидация IQ/OQ.

Набор для определения концентрации и жизнеспособности бактерий:

• для проточной цитометрии (лазер 488 нм);
• состав — SYTO 9, йодид пропидия (PI); калибровочные микросферы (6 мкм) для определения концентрации;
• принцип действия: SYTO 9 (зеленый) окрашивает все клетки, PI (оранжево-красный) окрашивает клетки с поврежденной мембраной.