Главная особенность мультиплексного ИФА (иммуноферментного анализа) заключается в возможности одновременного определения десятков и даже сотен различных мишеней (аналитов) в одном небольшом объеме образца (например, в одной лунке планшета или в одной пробирке).
Если классический ИФА отвечает на вопрос «Сколько этого конкретного вещества в образце?», то мультиплексный ИФА отвечает на вопрос «Каков полный профиль этих веществ в образце?».
Техническая и методическая особенность мультиплексного анализа кроется в том, как именно система понимает, какой именно аналит был детектирован, ведь реакция идет в общем объеме. Для этого используется кодирование сигнала (спектральное или пространственное).
Как это реализуется технически (основные платформы)
Чтобы разделить сигналы от разных антител в одной лунке, используются специальные технологии:
- Технология микросфер (например, Luminex xMAP / Bio-Plex), где вместо дна планшета используются крошечные полимерные шарики (микросферы). Эти шарики окрашены флуоресцентными красителями в разные «оттенки» (спектральное кодирование).
- Электрохемилюминесценция (например, MSD — Meso Scale Discovery), где используется пространственное кодирование. Дно луночки покрыто не одним слоем, а массивом из нескольких (обычно до 10) крошечных графитовых или золотых электродов.
- Планарные микрочипы (Protein microarrays), где антитела наносятся на твердую подложку (стекло или мембрану) в виде строгой матрицы (сетки) из микропятен. Каждое пятно знает свою мишень.
- Пространственный мультиплексный ИФА, где используются классические подходы метода, в совокупности с оптимизированным подбором панели антител в формате 96-луночного планшета.
Мультиплексные ИФА-наборы arigoPLEX — это современное решение для детекции нескольких аналитов в образце методом ИФА. Входящие в комплект панели антител и мультиплексные ИФА-наборы подходят для обнаружения множества ключевых белков или факторов, делающее исследования простыми, эффективными и экономичными.
Этот метод существенно уступает технологии xMAP по количеству аналитов определяемых в 1 лунке, поскольку для анализа каждого аналита в каждом образце используется отдельная лунка. С другой стороны, мультиплексный ИФА позволяет в формате 96-луночного планшета проанализировать до 8 аналитов в десятке образцов с использованием классического ИФА-оборудования.
Преимущества arigoPLEX
- Одновременное измерение 4 или 8 факторов;
-
количественное определение цитокинов в диапазоне пг/мл;
-
использование одного реагента для обнаружения;
-
измерение с помощью обычного ИФА-ридера при 450 нм.
Области применения
- Воспалительные цитокины и хемокины.
- Поляризация M1/M2.
- Активация нейтрофилов.
- Баланс Th1/Th2/Th17/Treg.
- Аллергия.
- CAR-T, CTL/NK и γδ T-клетки, фибротические маркеры.
- Ангиогенные маркеры.
- Адипокины, связанные с ИР.
- ММП.
Таким образом arigoPLEX
— это элегантный компромисс между классикой ИФА и реальным мультиплексом xPlex. Его главная особенность — позволить любой лаборатории, у которой есть самый обычный, дешевый ИФА-ридер, делать мультиплексный анализ (сразу 4 или 8 маркеров) без покупки оборудования за сотни тысяч долларов. Вы жертвуете частью образца и местом на планшете (используя 4-8 лунок вместо одной), но получаете надежные данные без риска перекрестной реактивности антител, который часто бывает при их физическом смешивании в одной лунке.
|
Характеристика
|
arigoPLEX
|
Luminex / MSD
|
|
Где идет реакция?
|
В 4 или 8 разных лунках на один образец.
|
В одной
лунке на один образец.
|
|
Расход образца
|
Выше (нужно разделить образец на 4-8 лунок).
|
Минимальный (всё в одной лунке).
|
|
Оборудование
|
Любой стандартный ИФА-ридер
(450 нм).
|
Дорогостоящие спец. приборы (проточные цитометры, MSD).
|
|
Риск перекрестной реакции
|
Отсутствует (антитела физически разнесены по разным лункам и не мешают друг другу).
|
Выше (все антитела перемешаны в одном объеме).
|
|
Мультиплексность (плекс)
|
Низкая (обычно 4 или 8 показателей).
|
Высокая (до 50-500 показателей в одной лунке).
|
|
Пропускная способность
|
Ниже (на 96-луночном планшете для 4-plex поместится только 24 образца).
|
Выше (на 96-луночном планшете можно проверить 96 образцов на 50+ показателей).
|
Таким образом arigoPLEX — это элегантный компромисс между классикой ИФА и реальным мультиплексом xPlex. Его главная особенность — позволить любой лаборатории, у которой есть самый обычный, дешевый ИФА-ридер, делать мультиплексный анализ (сразу 4 или 8 маркеров) без покупки оборудования за сотни тысяч долларов. Вы жертвуете частью образца и местом на планшете (используя 4-8 лунок вместо одной), но получаете надежные данные без риска перекрестной реактивности антител, который часто бывает при их физическом смешивании в одной лунке.
